Die Gebrüder Mario und Luigi sind Betreiber eines New Yorker Klempnerunternehmens. Durch ein unterirdisches Labyrinth gelangen sie eines Tages in das Pilz-Königreich, einen bunten Ort, bevölkert von allerlei eigenartigen Wesen. Gemeinsam mit der Prinzessin Peach und dem Pilz Toad muss Mario seinen Bruder Luigi sowie die gesamte Welt vor dem bösartigen Bowser bewahren.